Фамилия Настюшенко образована от имени Настя — народной формы канонического женского имени Анастасия. Суффикс -енко указывает на украинское или южнорусское происхождение: в этой модели фамилии означали «чей-то потомок» или «чей-то сын». То есть Настюшенко — буквально «сын Насти» или «потомок Насти». В отличие от русских фамилий на -ов/-ев, которые часто закреплялись за крестьянами и мещанами, украинские фамилии на -енко в XVII–XVIII веках были распространены среди казаков и свободных поселенцев, но со временем стали массовыми и для других сословий.

Интересная деталь — в основе лежит не просто Настя, а уменьшительно-ласкательная форма Настюша. Такое словообразование встречается реже, чем фамилии от полного имени (Настенко, Настин). Суффикс -юш- придаёт основе оттенок нежности или, возможно, указывал на прозвище по имени матери или бабушки, которую в семье ласково звали Настюшей. В среде украинского крестьянства и казачества прозвища по женским именам давали детям, росшим без отца или при сильном влиянии материнской линии.

Географически фамилия Настюшенко чаще всего встречается на востоке Украины и в смежных областях России (Белгородская, Курская, Ростовская области). Это зона, где украинские фамилии на -енко исторически соседствовали с русскими на -ов, и написание могло варьироваться. Встречаются варианты Настюшенко и Настюшенко — с разной ударной гласной, но корень один.

Если говорить о социальном контексте, то носители фамилии в XIX веке могли быть как крестьянами, так и мещанами небольших городов. Дворянских родов с такой фамилией не зафиксировано — она типично народная, без приставок и указаний на шляхетское происхождение. В советское время фамилия не менялась и не русифицировалась, сохранив украинскую словообразовательную модель.